Investigating non-small cell lung cancer epithelial cell immune properties ex vivo
Ojanen, Una (2017)
Ojanen, Una
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2017
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201705086896
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201705086896
Tiivistelmä
Tämä projekti toteutettiin Suomen molekyylilääketieteen instituutissa (FIMM) Emmy Verschurenin tutkimusryhmässä. Ryhmä tutkii keuhkosyöpää ja keskittyy keuhkosyöpään liittyvien tuumorisuppressorien kemiallisten ja biologisten ominaisuuksien tutkimiseen. Ryhmä käyttää tätä tietoa luodakseen parempia keuhkosyöpämalleja, jotka mahdollistavat uusien sairauksien ehkäisyyn tähtäävien strategioiden kehityksen.
Tämän projektin tarkoituksena oli selvittää, vaihteleeko immunologisten geenien ilmentyminen hiirien Kras;Lkb1-geenien muutosten aikaan saamissa ei-pienisoluisen keuhkosyövän kasvaimissa. Kasvainsoluviljelmät olivat luotu ja viljelty uudelleenohjelmoituina epiteelisoluina (conditionally reprogrammed cell) perustuen kasvaimien solualkuperään (CC10+ ja SPC+). Projektissa vertaillut geenit olivat Interleukiini 1β (Il-1β), Arginaasi 1 (Arg1), Interleukiini 6 (Il-6,) Cxcl5 ja Ccl2. Tarkastelimme projektia kolmesta eri koeasetelmasta: (1) eri kasvaimien geenien ilmentymisen vertailu, (2) kasvaimien ja niistä luotujen uudelleenohjelmoitujen solujen geenien ilmentymisen vertailu sekä (3) kasvatusliuoksen vaikutus uudelleenohjelmoitujen solujen geenien ilmentymiseen.
Ensimmäisessä koeasetelmassa Il-1β, Arg1 ja Cxcl5 geenit ilmentyivät KL-CC10- kasvaimissa enemmän verrattuna KL-SPC-kasvaimiin, kun taas Il-6 geenin ilmentyminen oli päinvastaista ja Ccl2 geenin ilmentymisessä ei näkynyt eroa.
Toisen koeasetelman tulokset viittaavat siihen, että solulinjat ilmentävät mainittuja geenejä vähemmän kuin niiden vastaavat kasvaimet. Tämä oli nähtävissä erityisesti Il-1β geenin kohdalla. Il-1β geenin ilmeneminen solulinjoissa oli niin vähäistä, että se oli hankala todentaa qRT-PCR:llä. Poikkeuksia oli kuitenkin havaittavissa, KN85A-solulinja ilmensi Il-6 ja Ccl2 geenejä suuremmissa määrin kuin vastaava kasvain.
Kolmannessa koeasetelmassa selvisi, että kasvatusliuoksella ei ollut vaikutusta geenien ilmentymiseen 3⁄4 solulinjassa, mutta Il-6 ja Ccl2 geenien ilmentyminen oli suurempaa KN85A solujen maljalla, johon oli vaihdettu stroomasoluviljelmästä eristetty kasvatusliuos. Tämä tulos viittaa siihen, että kasvatusliuos joka on eristetty stroomasoluviljelmästä, vaikuttaa vain tiettyjen solulinjojen geenien ilmentymiseen.
Tämän projektin tarkoituksena oli selvittää, vaihteleeko immunologisten geenien ilmentyminen hiirien Kras;Lkb1-geenien muutosten aikaan saamissa ei-pienisoluisen keuhkosyövän kasvaimissa. Kasvainsoluviljelmät olivat luotu ja viljelty uudelleenohjelmoituina epiteelisoluina (conditionally reprogrammed cell) perustuen kasvaimien solualkuperään (CC10+ ja SPC+). Projektissa vertaillut geenit olivat Interleukiini 1β (Il-1β), Arginaasi 1 (Arg1), Interleukiini 6 (Il-6,) Cxcl5 ja Ccl2. Tarkastelimme projektia kolmesta eri koeasetelmasta: (1) eri kasvaimien geenien ilmentymisen vertailu, (2) kasvaimien ja niistä luotujen uudelleenohjelmoitujen solujen geenien ilmentymisen vertailu sekä (3) kasvatusliuoksen vaikutus uudelleenohjelmoitujen solujen geenien ilmentymiseen.
Ensimmäisessä koeasetelmassa Il-1β, Arg1 ja Cxcl5 geenit ilmentyivät KL-CC10- kasvaimissa enemmän verrattuna KL-SPC-kasvaimiin, kun taas Il-6 geenin ilmentyminen oli päinvastaista ja Ccl2 geenin ilmentymisessä ei näkynyt eroa.
Toisen koeasetelman tulokset viittaavat siihen, että solulinjat ilmentävät mainittuja geenejä vähemmän kuin niiden vastaavat kasvaimet. Tämä oli nähtävissä erityisesti Il-1β geenin kohdalla. Il-1β geenin ilmeneminen solulinjoissa oli niin vähäistä, että se oli hankala todentaa qRT-PCR:llä. Poikkeuksia oli kuitenkin havaittavissa, KN85A-solulinja ilmensi Il-6 ja Ccl2 geenejä suuremmissa määrin kuin vastaava kasvain.
Kolmannessa koeasetelmassa selvisi, että kasvatusliuoksella ei ollut vaikutusta geenien ilmentymiseen 3⁄4 solulinjassa, mutta Il-6 ja Ccl2 geenien ilmentyminen oli suurempaa KN85A solujen maljalla, johon oli vaihdettu stroomasoluviljelmästä eristetty kasvatusliuos. Tämä tulos viittaa siihen, että kasvatusliuos joka on eristetty stroomasoluviljelmästä, vaikuttaa vain tiettyjen solulinjojen geenien ilmentymiseen.