Lipolyysin tutkiminen hiiren adiposyyteillä in vitro spektrofotometrian ja fluorometrian avulla
Mäkelä, Satu (2011)
Mäkelä, Satu
Turun ammattikorkeakoulu
2011
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201105168048
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201105168048
Tiivistelmä
Opinnäytetyön tavoitteena oli määrittää glyserolipitoisuudet adiposyyttien kasvatusliuoksesta. Solunäytteet olivat peräisin villityypin hiiristä sekä transgeenisistä neuropeptidi Y:tä (NPY) yli-ilmentävistä hiiristä. Transgeeniset hiiret olivat lihavampia kuin villityypin hiiret. Tutkittiin, onko näiden hiirityyppien rasvasolujen lipolyysissä eroa toisiinsa verrattuna ja onko transgeenisten hiirten beetavälitteinen lipolyysiaktiivisuus vähentynyt samalla tavoin kuin ylipainoisilla ihmisillä. Näytteet olivat basaaleja eli käsittelemättömiä tai käsiteltyjä NPY:llä tai isoprenaliinin eri pitoisuuksilla. Tutkittiin myös kyseisten lääkeaineiden vaikutusta rasvan vapautumiseen. NPY on keskushermostossa laajalti tuotettu välittäjäaine ja sympaattisen hermoston välittäjäaine, joka vapautuu sympaattisista hermopäätteistä yhdessä noradrenaliinin kanssa.
Lipolyysin tutkimiseksi määritysmenetelmä optimoitiin vertaamalla kolmea kaupallista kittiä spektrofotometrisesti ja/tai fluorometrisesti sekä testaamalla deproteinisaatiokäsittelyä. Valittiin detektioherkkyydeltään tarkin menetelmä, jonka avulla näytteiden glyserolipitoisuudet määritettiin.
Tämän opinnäytetyön toimeksiantaja oli Turun yliopiston Biolääketieteen laitos, jossa pyritään kehittämään uusia NPY-systeemiin vaikuttavia lääkehoitostrategioita tiettyjen tautien, kuten kiihtyneen ateroskleroosin tai diabeettisen retinopatian, ehkäisemiseksi. Tämä opinnäytetyö on osa laajempaa tutkimusta (FM Laura Vähätalon väitöskirja), jossa tutkitaan NPY:n vaikutusta ihmisen metabolisen oireyhtymän syntyyn hiirimallissa.
Työssä käytetyt kaupalliset kitit ja spektrofotometrinen sekä fluorometrinen menetelmä eivät olleet riittävän herkkiä, jotta kaikkien näytteiden glyserolipitoisuudet olisi voitu määrittää. BioVisionin Free Glycerol Assay -kitin ja fluorometrian avulla saatiin näkymään näytteiden isoprenaliiniannosvaste. Tekemieni määritysten perusteella transgeenisten hiirten beetavälitteinen lipolyysiaktiivisuus oli lisääntynyt eli isoprenaliini stimuloi lipolyysiä kummallakin hiirityypillä, mutta transgeenisillä hiirillä vielä vahvemmin.
Lipolyysin tutkimiseksi määritysmenetelmä optimoitiin vertaamalla kolmea kaupallista kittiä spektrofotometrisesti ja/tai fluorometrisesti sekä testaamalla deproteinisaatiokäsittelyä. Valittiin detektioherkkyydeltään tarkin menetelmä, jonka avulla näytteiden glyserolipitoisuudet määritettiin.
Tämän opinnäytetyön toimeksiantaja oli Turun yliopiston Biolääketieteen laitos, jossa pyritään kehittämään uusia NPY-systeemiin vaikuttavia lääkehoitostrategioita tiettyjen tautien, kuten kiihtyneen ateroskleroosin tai diabeettisen retinopatian, ehkäisemiseksi. Tämä opinnäytetyö on osa laajempaa tutkimusta (FM Laura Vähätalon väitöskirja), jossa tutkitaan NPY:n vaikutusta ihmisen metabolisen oireyhtymän syntyyn hiirimallissa.
Työssä käytetyt kaupalliset kitit ja spektrofotometrinen sekä fluorometrinen menetelmä eivät olleet riittävän herkkiä, jotta kaikkien näytteiden glyserolipitoisuudet olisi voitu määrittää. BioVisionin Free Glycerol Assay -kitin ja fluorometrian avulla saatiin näkymään näytteiden isoprenaliiniannosvaste. Tekemieni määritysten perusteella transgeenisten hiirten beetavälitteinen lipolyysiaktiivisuus oli lisääntynyt eli isoprenaliini stimuloi lipolyysiä kummallakin hiirityypillä, mutta transgeenisillä hiirillä vielä vahvemmin.