Iän vaikutus uudelleenohjelmoiduista kantasoluista erilaistettuihin sydänlihassoluihin
Vikstedt, Emma (2016)
Vikstedt, Emma
Tampereen ammattikorkeakoulu
2016
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2016080813650
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2016080813650
Tiivistelmä
Uudelleenohjelmoiduista kantasoluista (iPS-solut) erilaistetut sydänlihassolut tarjoavat mahdollisuuden tutkia sydänsairauksia sekä tehdä lääketestauksia in vitro. Nykyisillä erilaistusmenetelmillä saadut sydänlihassolut ovat kuitenkin epäkypsiä ja eroavat aikuisen sydänlihassoluista morfologialtaan ja toiminnallisilta ominaisuuksiltaan.
Kypsempiä sydänlihassoluja halutaan saada, koska aikuisen sydänlihassolujen eristäminen sydämestä on hankalaa. Kypsemmät sydänlihassolut ovat todennäköisesti myös fysiologisilta ominaisuuksiltaan lähempänä aikuisen sydänlihassoluja ja näin ollen ne ovat hyödyllisempiä esimerkiksi lääketestauksissa ja sydänsairauksien tutkimisessa.
Opinnäytetyön tavoitteena oli verrata toisiinsa eri-ikäisiä iPS-soluista erilaistettuja sydänlihassoluja ja tutkia eroja niiden morfologiassa ja geeniekspressiossa. Opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia eri-ikäisiä sydänlihassoluja immunovärjäyksen ja qPCR:n avulla ja arvioida ovatko vanhat solut ominaisuuksiltaan lähempänä aikuisen ihmisen sydänlihassoluja.
Työssä vertailtiin eri-ikäisiä iPS-soluista erilaistettuja sydänlihassoluja. Soluja analysoitiin käyttämällä immunosytokemiallista värjäystä. Opinnäytetyössä käytettiin hyödyksi myös CytoSpectre-ohjelmaa, jolla sai tietoa sarkomeerien järjestäytyneisyydestä. qPCR-menetelmän avulla tutkittiin 7 eri geenin ekspressiota, joiden geeniekspressiota maturaatiotason määrittämiseksi verrattiin aikuisen sydämen ekspressiotasoihin.
Eri-ikäisissä sydänlihassoluissa huomattiin eroja sekä vasta-ainemäärityksissä että geeniekspressiossa. Soluviljelyaika näyttäisi huomattavasti vaikuttavan iPS-soluista erilaistettujen sydänlihassolujen morfologiaan ja geeniekspressioon. Tulevaisuudessa iPS-soluista erilaistettujen sydänlihassolujen maturaation edistämiseksi voisi kokeilla esimerkiksi kilpirauhashormonin (T3) lisäystä erilaistuksen aikana.
Kypsempiä sydänlihassoluja halutaan saada, koska aikuisen sydänlihassolujen eristäminen sydämestä on hankalaa. Kypsemmät sydänlihassolut ovat todennäköisesti myös fysiologisilta ominaisuuksiltaan lähempänä aikuisen sydänlihassoluja ja näin ollen ne ovat hyödyllisempiä esimerkiksi lääketestauksissa ja sydänsairauksien tutkimisessa.
Opinnäytetyön tavoitteena oli verrata toisiinsa eri-ikäisiä iPS-soluista erilaistettuja sydänlihassoluja ja tutkia eroja niiden morfologiassa ja geeniekspressiossa. Opinnäytetyön tarkoituksena oli tutkia eri-ikäisiä sydänlihassoluja immunovärjäyksen ja qPCR:n avulla ja arvioida ovatko vanhat solut ominaisuuksiltaan lähempänä aikuisen ihmisen sydänlihassoluja.
Työssä vertailtiin eri-ikäisiä iPS-soluista erilaistettuja sydänlihassoluja. Soluja analysoitiin käyttämällä immunosytokemiallista värjäystä. Opinnäytetyössä käytettiin hyödyksi myös CytoSpectre-ohjelmaa, jolla sai tietoa sarkomeerien järjestäytyneisyydestä. qPCR-menetelmän avulla tutkittiin 7 eri geenin ekspressiota, joiden geeniekspressiota maturaatiotason määrittämiseksi verrattiin aikuisen sydämen ekspressiotasoihin.
Eri-ikäisissä sydänlihassoluissa huomattiin eroja sekä vasta-ainemäärityksissä että geeniekspressiossa. Soluviljelyaika näyttäisi huomattavasti vaikuttavan iPS-soluista erilaistettujen sydänlihassolujen morfologiaan ja geeniekspressioon. Tulevaisuudessa iPS-soluista erilaistettujen sydänlihassolujen maturaation edistämiseksi voisi kokeilla esimerkiksi kilpirauhashormonin (T3) lisäystä erilaistuksen aikana.